T4 Polynucleotide Kinase说明书
产品名称：T4 Polynucleotide Kinase
产品货号：#RDA08
产品规格：2500 units
产品说明
T4 Polynucleotide Kinase能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链DNA或RNA）的5’-羟基末端以及3’-单磷酸核苷上。T4 Polynucleotide Kinase还具有3’磷酸酶活性，将3’-磷酸基团从寡核苷酸的3’磷酸末端、脱氧3’-单磷酸核苷和脱氧3’-二磷酸核苷上水解掉。
产品组分
名称 | 规格 |
T4 Polynucleotide Kinase | 2500U |
活性定义
1单位指37℃条件下，30分钟内催化1nmol酸不溶性[32P]掺入所需要的酶量。
产品应用
DNA或RNA 5’末端的磷酸化，以便进行连接反应，以及磷酸化引物引导PfAgo切割单链DNA，用于检测和大片段组装。
DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序。
将3’端已经磷酸化的单核苷酸5’磷酸化，制备pNp底物，用于添加到DNA或 RNA的3’端。
对3’端有磷酸基团的寡核苷酸的5’端进行标记。
产品储存
-20℃可保存3年。
注意事项
（1）1×T4 Polynucleotide Kinase反应缓冲液：70 mM Tris-HCl pH 7.6，10 mM MgCl2，5 mM DTT，37°C温育。
（2）热失活：65°C加热20分钟。
（3）在放射性标记实验中，可用1×T4 Polynucleotide Kinase反应缓冲液、50 pmol 的γ-[32P] ATP和20单位的酶37℃温育30分钟。
（4）T4 Polynucleotide Kinase需要ATP才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应，在随酶提供的反应缓冲液中不含ATP。因此在磷酸化修饰核酸时请单独添加终浓度0.5~1 mM ATP。
（5）要提高平齐末端或5’凹陷末端的磷酸化效率，可在加入T4 Polynucleotide Kinase前，先将DNA溶液于70°C加热5分钟，然后冰上冷却，并加入5%（W/V）的PEG-8000。
（6）一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 Polynucleotide Kinase反应在连接酶反应缓冲液中37°C温育30分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它DNA片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 Polynucleotide Kinase。
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