2×BioRun Pfu PCR Mix
货号：#RAC00
规格：5mL/包
保存：-20℃，1年
产品说明
2×BioRun Pfu PCR Mix是一种即用型的高保真PCR Mix，仅需要加入DNA模板和引物即可进行PCR扩增。2×BioRun Pfu PCR Mix中的DNA聚合酶经过蛋白质工程技术改造，具有优秀的持续合成能力和保真性，适合较长片段的高保真扩增，该聚合酶的保真性是Pfu DNA聚合酶的2倍，扩增速率是Pfu的4-8倍。Mix还添加了延伸促进辅酶和解产物抑制辅酶，使其在长片段扩增、高产量方面有极大提高。经过严格质控，2×BioRun Pfu PCR Mix无非特异性核酸酶活性残留，无宿主基因组DNA残留，适用于实验室常规克隆及高保真克隆。
产品特点
1、超高保真性，连续扩增12kb质粒DNA无差错；
2、长片段扩增，可扩增20kb的质粒/病毒DNA片段；
3、产量高。
适用范围
高保真PCR，载体构建，定点突变，同源重组
产品组成
Component | #RAC00 |
2×BioRun Pfu PCR Mix | 5mL |
活力单位定义：在72℃、30min内，催化10nmol脱氧核苷酸加入到酸性不溶物沉淀中所需的酶量。
质量控制
1、以2kb/min的速率从10ng λDNA上扩增10kb DNA片段，25个循环即得到5-10μg目的产物；
2、以2kb/min的速率从水稻基因组DNA上扩增1.2kb DNA片段，30个循环即得到至少5μg目的产物；
3、2×BioRun Pfu PCR Mix与pUC19质粒在CutSmart buffer中37℃孵育16h，DNA无任何变化。
推荐的PCR体系与条件
①PCR体系：
组分 | 用量 |
2×BioRun Pfu PCR Mix | 12.5μL |
Primer F（10μM） | 0.5-1μL |
Primer R（10μM） | 0.5-1μL |
模板DNA | 1-100ng |
ddH2O | 补至25μL |
引物设计工具：http://www.biorun.com/tools/101.html
②PCR条件：
步骤 | 时间 | 循环数 |
95℃ | 3-5 min | 1 |
95℃ | 15s | 25-35 |
Tm℃ | 15s | |
72℃ | 2kb/min | |
72℃ | 5min | 1 |
4℃ | ∞ | 1 |
引物Tm值计算工具：http://www.biorun.com/tools/102.html
扩增实例
①2×BioRun Pfu PCR Mix扩增pET-30a(+)载体（约5kb），26个循环。
②2×BioRun Pfu PCR Mix从水稻基因组DNA上扩增1.3kb启动子片段，30个循环。
③2×BioRun Pfu PCR Mix用于多片段一次性组装克隆（配合2×Seamless Cloning Mix 货号：#RDA01），30个循环。
④2×BioRun Pfu PCR Mix连续扩增12kb质粒DNA的碱基错误率。
注意事项
1、扩增高GC片段时，如果条带弱请适当增加变性和预变性时间，并适当降低延伸速率。
2、当引物特异性较差时，推荐使用降落PCR程序。
3、本产品主要用于高保真克隆，菌落PCR、动植物组织扩增请选择伯远其他聚合酶产品。
4、2×BioRun Pfu PCR Mix扩增产物为平末端，无法用于TA克隆，请知悉。
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